Afucosylated IgG는 외피 바이러스 반응을 특성화하고 COVID-19 심각도와 상관 관계가 있습니다.

Afucosylated IgG는 외피 바이러스 반응을 특성화하고 COVID-19 심각도와 상관 관계가 있습니다.
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항체는 비가 변 꼬리 (Fc) 도메인을 기반으로 여러 클래스로 나뉩니다. 이 영역은 서로 다른 면역 세포 수용체와 상호 작용하고 단백질을 보완하여 뚜렷한 면역 반응을 지시합니다. 면역 글로불린 G (IgG) 항체의 Fc 도메인은 위치 297에 보존 된 N- 연결 글리 칸을 포함합니다. 그러나이 위치에서 사용되는 특정 글리 칸은 매우 가변적입니다. 이 위치에서 코어 푸코 실화가 결여 된 IgG는 Fc 수용체 FcRIIIa에 대한 증가 된 친화성에 의해 향상된 항체 의존성 세포 독성을 개시합니다. Larsen

등 중증 증상이있는 COVID-19 환자는 경증 환자에 비해 항 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2) IgG 어 푸코 실화 수준이 증가했다고보고합니다. 이러한 결과는 푸코 실화 된 항 -SARS-CoV-2 항체를 가진 COVID-19 환자의 치료가 중증 COVID-19와 관련된 병리를 우회 할 수 있음을 시사합니다.

Science , 이번 호 p. eabc8378

구조화 된 추상

소개

항체 기능은 종종 정적으로 간주되며 대부분 isotype 및 subclass에 의해 결정됩니다. 면역 글로불린 G (IgG)의 Fc 도메인에서 위치 297에있는 보존 된 N- 연결 글리 칸은 항체의 이펙터 기능에 필수적입니다. 더욱이,이 글리 칸은 특히 코어 푸 코스 모이어 티에 대해 매우 가변적이고 기능적으로 관련이 있습니다. 코어 푸코 실화 (afucosylated IgG)가 부족한 IgG는 IgG-Fc 수용체 IIIa (FcγRIIIa) 친화도를 크게 증가시켜 항체 의존성 세포 독성 (ADCC)을 증가시킵니다. 90 % 이상의 일정한 수준의 총 혈장 IgG-Fc 푸코 실화에도 불구하고, 낮은 코어 푸코 실화를 갖는 특정 IgG 반응이 산발적으로보고되었습니다. 이들은 혈액 세포의 동종 항원과 HIV 및 뎅기 바이러스의 당 단백질에 대한 것입니다. 이 연구에서 우리는 다양한 항원에 대한 어 푸코 실화 IgG의 유도를 조사하고 COVID-19에서 그 역학과 전 염증 가능성을 묘사했습니다.

이론적 해석

어 푸코 실화 된 IgG 반응은 세포 혈액형에 대한 다양한 동종 면역 반응에서만 발견되었습니다. 두 개의 외피 바이러스. 따라서 우리는 외부 표면에 노출 된 막 내장 단백질이 특정 B 세포 반응을 유도하여 어 푸코 실화 된 IgG를 유발한다는 가설을 테스트했습니다. 우리는 외피 바이러스 및 비 외피 바이러스, 단백질 서브 유닛 예방 접종 및 약독 화 생 바이러스 예방 접종에 의한 자연 감염에 대한 면역 반응을 비교했습니다. 우리는 또한 COVID-19에서 그러한 반응의 임상 결과와의 관계를 평가했습니다.

결과

혈액 세포 동종 항원과 유사하게 모든 외피 바이러스에 대한 반응은 항원 특이 적 IgG. 대조적으로, 비 외피 바이러스 인 파보 바이러스 B19에 대한 IgG는 고도로 푸코 실화되었습니다. 어 푸코 실화 된 IgG 반응의 정도는 개인과 항원 사이에서 다양했습니다. B 형 간염 바이러스에 대한 서브 유닛 백신 접종 후에 유도가 일어나지 않았기 때문에 바이러스 컨텍스트는 어 푸코 실화 된 IgG를 유도하는 데 필수적이었습니다. 그러나, 약독 화 된 바이러스에 대한 반응에서 어 푸코 실화 된 IgG 반응이 발견되었다. 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2) 특이적인 어 푸코 실화 IgG도 중증 COVID-19 환자에서 발견되었지만 경증 증상이있는 개인에서는 발견되지 않았습니다. 혈청 전환 후 2 주 동안 푸코 실화 된 항 -SARS-CoV-2 IgG의 양이 현저하게 증가하여 대부분의 경우 총 IgG에서 발견되는 것과 유사한 상대적 수준에 도달했습니다. 어 푸코 실화 된 IgG는 시험관 내에서 배양 된 대 식세포에서 인터루킨 -6 (IL-6) 방출을 촉진하며, 이는 SARS-CoV-2 특이 IgG 어 푸코 실화와 IL-6 및 C- 반응성 단백질 (CRP)의 관찰 된 연관성과 일치합니다. 환자.

결론

이 연구는 숙주 세포의 맥락에서 외부 B 세포 항원을 제공하는 것이 어 푸코 실화 된 IgG 면역 반응을 유발하는 데 필요할 수 있음을 시사합니다. 이 반응의 강도는 항원마다 그리고 개인마다 매우 다양합니다. 어 푸코 실화 된 IgG 반응은 강력한 면역 반응으로, FcγRIII- 발현 자연 살해 (NK) 및 골수 세포에 의한 표적 세포의 파괴를 위해 연마되었습니다. 이것은 때때로 바람직 할 수 있습니다 (예 : HIV에 대한). 약독 화 된 바이러스 백신 또는 mRNA 백신의 경우와 같이 표적을 표면 단백질로 제공하여 백신에서 달성 할 수 있습니다. 그러나 SARS-CoV-2의 경우,이 어 푸코 실화 된 IgG 반응은 혈청 전환시 바이러스 부하가 높은 조건에서 COVID-19의 악화를 촉진 할 수 있습니다.

어 푸코 실화 된 IgG 반응은 막 컨텍스트를 필요로하며 강력한 FcγRIII 매개 활성을 초래합니다.

숙주 세포의 막 결합 만이 다른자가의 맥락에서 B 세포 수용체를 촉발하는 외래 항원을 부여합니다. afucosylated IgG 반응으로 이어지는 수용체. 어 푸코 실화 된 IgG의 증가 된 FcγRIII 결합 및 활성은 경우에 따라 보호 할 수 있지만 SARS-CoV-2의 경우 자연 감염시 과도한 염증을 유발합니다.

“data-hide-link-title=”0″data-icon-position=””href=”https://science.sciencemag.org/content/sci/371/6532/eabc8378/F1.large.jpg?width=800&height=600&carousel=1″rel=”gallery-fragment-images-686031066″title=”어 푸코 실화 된 IgG 반응은 막 컨텍스트를 필요로하며 강력한 FcγRIII 매개 활성을 초래합니다. 숙주 세포의 막 결합 만이 다른자가 수용체의 맥락에서 B 세포 수용체를 촉발하는 외래 항원을 부여하여 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 유도합니다. 어 푸코 실화 된 IgG의 상승 된 FcγRIII 결합 및 활성은 경우에 따라 보호 할 수 있지만 SARS-CoV-2의 경우 자연 감염시 과도한 염증을 유발합니다. “>

어 푸코 실화 IgG 반응은 막 컨텍스트를 필요로하며 강력한 FcγRIII 매개 활성을 초래합니다.

숙주 세포의 막 결합 만이 다른자가 수용체의 맥락에서 B 세포 수용체를 유발하는 외래 항원을 부여하여 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 유도합니다. 일부 cas에서 afucosylated IgG의 안전하지만 SARS-CoV-2의 경우 자연 감염시 과도한 염증을 유발합니다.

요약

면역 글로불린 G ( IgG) 항체는 침입하는 병원체에 대한 보호에 중요합니다. IgG 기능에 필수적인 IgG-Fc 꼬리 내의 고도로 보존 된 N- 연결 글리 칸은 인간에서 다양한 구성을 보여줍니다. 어 푸코 실화 된 IgG 변이체는 Fc 수용체 (FcγRIIIa)를 통한 활성 증가를 위해 항암 치료 용 항체에 이미 사용되고 있습니다. 여기에서 우리는 afucosylated IgG (인간에서 총 IgG의 약 6 %)가 외피 바이러스에 대해 특이 적으로 형성되지만 일반적으로 다른 항원에 대해서는 형성되지 않는다고보고합니다. 이것은 더 강한 FcγRIIIa 반응을 매개하지만 양조 사이토 카인 폭풍과 면역 매개 병리를 증폭시킵니다. 중증의 COVID-19 환자 (경미한 증상은 아님)는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2)에 대한 고농도의 어 푸코 실화 IgG 항체를 가지고있어 전 염증성 사이토 카인 방출 및 급성기 반응을 증폭 시켰습니다. 따라서 항체 글리코 실화는 COVID-19를 포함한 외피 바이러스에 대한 면역 반응에 중요한 역할을합니다.

항체 기능은 오랫동안 정적 인 것으로 간주되어 왔으며 대부분 그들의 아이소 타입과 서브 클래스. 면역 글로불린 G (IgG)의 Fc 도메인에서 위치 297에 보존 된 N- 연결 글리 칸의 존재는 이펙터 기능에 필수적입니다 (1). 더욱이,이 글리 칸의 구성은 매우 다양하여 기능적 결과를 가져옵니다 ( 2 4 ). 이것은 특히 Fc 글리 칸에 부착 된 코어 푸 코스의 경우에 해당됩니다. 코어 푸코 실화가없는 IgG 변이체가 증가 된 IgG-Fc 수용체 IIIa (FcγRIIIa) 친 화성 ([GenBank: MN908947, produced in HEK cells with a HAVT20 leader peptide, 10x His tag, and a BirA tag (24)]을 통해 항체 의존성 세포 독성 (ADCC)을 증가 시킨다는 발견 5 , 6 ), 결과는 다음 -종양 표적화를위한 핵심 푸코 실화가 결여 된 세대 당-조작 단일 클론 항체 (mAbs) ( 7 ).

일반적으로 Fc 글리 칸의 변화는 연령, 성별 및자가 면역 질환과 관련이 있으며 연령이 증가함에 따라 꾸준히 감소하는 IgG-Fc 갈 락토 실화에서 가장 두드러집니다. 젊은 여성에서 현저한 상승 후 IgG-Fc 갈 락토 실화는 폐경기 동안 남성에서 볼 수있는 수준으로 감소합니다 ( 8 ). IgG-Fc 푸코 실화는 더 안정적이며 출생시부터 성인기에 ~ 94 %까지 약간 감소합니다 ( 9 ), 그 이후에는 평생 동안 약간의 감소가 있음에도 불구하고 상당히 일정하게 유지됩니다 ( 8 , 10 ).

명백한 것에도 불구하고 성인기 동안 일정한 수준의 Fc 푸코 실화, 적혈구 (RBC) 및 혈소판에 대한 동종 항체는 대부분의 환자에서 낮은 IgG-Fc 푸코 실화를 나타내며, 심지어 몇몇 경우에는 10 %까지 낮아집니다 ( 11 13 ). 대조적으로, 전체 혈청 IgG-Fc 푸코 실화는 지속적으로 높습니다. 또한, 낮은 IgG-Fc 푸코 실화는 임신 관련 동종 면역화에서 질병의 심각성을 결정하는 요인 중 하나이며, 어 푸코 실화 항체 ( 12 14 ). 혈소판 및 RBC 항원에 대한 특정 어 푸코 실화 IgG 반응 외에도,이 반응은 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV) 및 뎅기 바이러스 ([GenBank: MN908947, produced in HEK cells with a HAVT20 leader peptide, 10x His tag, and a BirA tag (24)]에 대해서만 확인되었습니다. 15 , 16 ). 항 HIV 항체의 낮은 코어 푸코 실화는 엘리트 감염 조절제의 특징으로 제안 된 반면, 뎅기열의 경우 과도한 Fcγ로 인해 병리가 강화되었습니다. RIIIa 활성화 ( 15 , 16 ). 그러나 IgG 코어 푸코 실화를 제어하는 ​​메커니즘은 아직 명확하지 않습니다.

유사한 afucosylated IgG는 다양한 동종 면역 반응에서 발견됩니다 ( 11 13 , 17 ), HIV ( 16 ) 및 뎅기열 ( 15 ), 이는 모두 표면에 노출 된 막 내장 단백질에 대한 것입니다. 따라서 HIV, 거대 세포 바이러스 (CMV), 홍역 바이러스, 유행성 이하선염 바이러스, B 형 간염 바이러스 (HBV) 및 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV)를 포함한 외피 바이러스에 의한 항 인간 혈소판 반응 및 자연 감염에서 IgG 글리코 실화를 분석했습니다. -2). 또한 비 외피 바이러스 (파보 바이러스 B19)에 대한 반응, HBV- 단백질 서브 유닛 백신 접종, 약독 화 생균 바이러스에 대한 반응을 평가하여 항원 컨텍스트가 IgG-Fc 글리코 실화의 중요한 결정 인자인지 여부를 테스트했습니다.

Afucosylated IgG는 엔벨로프 바이러스에 대해 형성됩니다

친 화성 정제 된 총 항체 및 항원 특이 적 항체의 IgG-Fc 글리코 실화는 직렬 액체 크로마토 그래피-질량 분석법 (LC-MS)으로 가능하게되었습니다 (그림 1 및 그림 S1) ( 12 , 17 , 18 ). 동종 항원 인간 혈소판 항원 1a (HPA-1a)에 대한 항원 특이 적 항체의 Fc 푸코 실화가 크게 감소했습니다 (그림 2A) ( 14 ), 다른 동종 항원에 대한 이전 결과와 유사합니다 ( 12 , 17 ). 혈소판 및 RBC 동종 항원과 유사합니다 ( 11 13 , 17 ), 엔벨로프 바이러스 CMV 및 HIV에 대한 반응은 항원 특이 적 IgG의 유의미한 어 푸코 실화를 보여주었습니다 (그림 2B). 대조적으로, 비 외피 바이러스 파보 바이러스 B19에 대한 IgG는 푸코 실화되었다 (도 2C). 총 IgG는 전체적으로 높은 푸코 실화 수준을 보였으며 (그림 2, A ~ C), IgG 반응의 대부분이 푸코 실화 된 IgG ( 12 , 18 , 19 ). 외피 바이러스에 대한 어 푸코 실화 된 IgG 반응의 정도는 개인간에 그리고 항원 유형간에 매우 다양했으며, 이는 다른 RBC 동종 항원에 대한 면역 반응의 관찰과 유사합니다 ( 17 ). Afucosylation은 CMV에서 특히 강하고 HIV에서 덜 두드러져 (그림 2B), HIV에서 이전 관찰을 확인합니다 (. 16 ). 어 푸코 실화 된 IgG 반응은 종종 갈 락토 실화 증가를 동반했습니다 (그림 S2).

무화과. 1 항체 특이 IgG1 흐름도 질량 분석법을 이용한 글리코 실화 분석

() 단백질 G 비드와 항원 코팅 된 96 웰 플레이트를 사용하여 혈청에서 항체를 포획하여 각각 총 및 항원 특이 적 IgG 분획을 생성했습니다. 그 후, 분리 된 IgG를 트립신으로 분해하고 생성 된 글리코 펩티드를 나노 -LC-MS로 분석했습니다. () Fc 글리코 실화 부위 Asn을 포함하는 글리코 펩티드의 대표적인 질량 스펙트럼 297 . (B) 중성 및 (C) 시알 릴화 된 IgG1 글리코 펩티드는 단일 환자의 전체 (위쪽, 검은 색) 및 항원 특이 적 (아래쪽, 빨간색) IgG1 분획에서 표시됩니다. 별표는 비 Fc 글리코 펩티드를 나타냅니다.

“data-hide-link-title=”0 “data-icon-position=” “href=”https://science.sciencemag.org/content /sci/371/6532/eabc8378/F2.large.jpg?width=800&height=600&carousel=1 “rel=”gallery-fragment-images-686031066 “title=”질량 분석법을 사용한 항체 특정 IgG1 글리코 실화 분석 흐름도 . (A) 단백질 G 비드와 항원 코팅 된 96 웰 플레이트를 사용하여 혈청에서 항체를 포획하여 각각 총 및 항원 특이 적 IgG 분획을 생성했습니다. 그 후, 분리 된 IgG를 트립신으로 분해하고 생성 된 글리코 펩티드를 나노 -LC-MS로 분석했습니다. (B 및 C) Fc 글리코 실화 부위 Asn297을 포함하는 글리코 펩티드의 대표적인 질량 스펙트럼. (B) 중성 및 (C) 시알 릴화 된 IgG1 글리코 펩티드는 단일 환자의 전체 (위쪽, 검은 색) 및 항원 특이 적 (아래쪽, 빨간색) IgG1 분획에서 표시됩니다. 별표는 비 Fc 글리코 펩티드를 나타냅니다. “>

그림 1 질량 분석법을 사용한 항체 특이 IgG1 당화 분석 흐름도

() 단백질 G 비드와 항원을 사용하여 혈청에서 항체를 포획했습니다. -코팅 된 96 웰 플레이트, resu 각각 총 및 항원 특이 적 IgG 분획에 포함됩니다. 그 후, 분리 된 IgG를 트립신으로 분해하고 생성 된 글리코 펩티드를 나노 -LC-MS로 분석했습니다. () Fc 글리코 실화 부위 Asn을 포함하는 글리코 펩티드의 대표적인 질량 스펙트럼 297 . (B) 중성 및 (C) 시알 릴화 된 IgG1 글리코 펩티드는 단일 환자의 전체 (위쪽, 검은 색) 및 항원 특이 적 (아래쪽, 빨간색) IgG1 분획에서 표시됩니다. 별표는 비 Fc 글리코 펩티드를 나타냅니다.

무화과. 2 외막 단백질 항원 등 (약독 화 된) 엔벨로프 바이러스 또는 동종 항원의 엔벨로프 단백질은 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 유발할 수 있습니다.

(이자형 ) IgG1-Fc 푸코 실화 수준의 총 (실선 원) 및 항원 특이 적 (개방 원) 항체는 각기 다른 색상으로 구분 된 각 그룹에 대해 표시됩니다. 항원 : (A) 동종 항원 HPA-1a; (B) CMV 및 HIV로부터의 바이러스 외피 항원; (C) 파보 바이러스 B19로부터의 비 외피 바이러스 항원; (D) HBsAg, HBV에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 재조합 가용성 HBsAg로 백신 접종 된 (오른쪽) 개체에서; 및 (E) 유행성 이하선염 바이러스에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 약독 화 생 유행성 이하선염 바이러스로 예방 접종 된 개체 (오른쪽)의 유행성 이하선염 바이러스 항원. 각 원은 생물학적 복제를 나타냅니다. 대표적인 LC-MS 실행 (기술 복제의 예는 그림 S1C에 제공됨). 통계 분석은 쌍으로 수행되었습니다 t (A), (B) 및 (C)에 대한 테스트와 사후 Bonferroni 수정이 포함 된 혼합 모델 양방향 ANOVA t 테스트 그룹 간의 Fc 푸코 실화 비교는 (D) 및 (E)에 대해 수행되었습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. * P P

“데이터 숨기기-링크 -title=”0″data-icon-position=””href=”https://science.sciencemag.org/content/sci/371/6532/eabc8378/F3.large.jpg?width=800&height=600&carousel=1 “rel=”gallery-fragment-images-686031066 “title=”(약독 화 된) 외피 바이러스 또는 동종 항원의 외피 단백질과 같은 외막 단백질 항원은 어 푸코 실화 IgG 반응을 유발할 수 있습니다. (A 내지 E) 총 (실선 원) 및 항원 특이 적 (개방 원) 항체의 IgG1-Fc 푸코 실화 수준은 각각 다른 색으로 코딩 된 항원 그룹에 대해 표시됩니다. (A) 동종 항원 HPA-1a; (B) CMV 및 HIV로부터의 바이러스 외피 항원; (C) 파보 바이러스 B19로부터의 비 외피 바이러스 항원; (D) HBsAg, HBV에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 재조합 가용성 HBsAg로 백신 접종 된 (오른쪽) 개체에서; 및 (E) 유행성 이하선염 바이러스에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 약독 화 생 유행성 이하선염 바이러스로 예방 접종 된 개체 (오른쪽)의 유행성 이하선염 바이러스 항원. 각 원은 대표적인 LC-MS 실행의 생물학적 복제 [(A) n=80 for anti-HPA-1a, (B) n=65 for CMV and n=40 for HIV, (C) n=22 for B19, (D) n=17 for naturally infected individuals for HBV and n=17 for HBV vaccinated individuals, and (E) n=24 naturally infected individuals for mumps virus and n=21 for mumps vaccinated individuals]를 나타냅니다 (기술 복제의 예는 그림 S1C에 제공됨). 통계 분석은 (A), (B) 및 (C)에 대해 쌍을 이룬 t 테스트로 수행되었으며, 그룹 간의 Fc 푸코 실화를 비교하기위한 사후 테스트의 Bonferroni 보정이 포함 된 혼합 모델 양방향 ANOVA가 (D)에 대해 수행되었습니다. ) 및 (E). 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. P

무화과. 2 외막 (약독 화 된) 엔벨로프 바이러스 또는 동종 항원의 엔벨로프 단백질과 같은 단백질 항원은 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 유발할 수 있습니다.

( t o 이자형) 총 IgG1-Fc 푸코 실화 수준 (실선 원 ) 및 항원 특이 적 (열린 원) 항체는 서로 다른 색으로 구분 된 각 항원 그룹에 대해 표시됩니다. (A) 동종 항원 HPA-1a; (B) CMV 및 HIV로부터의 바이러스 외피 항원; (C) 파보 바이러스 B19로부터의 비 외피 바이러스 항원; (D) HBsAg, HBV에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 재조합 가용성 HBsAg로 백신 접종 된 (오른쪽) 개체에서; 및 (E) 유행성 이하선염 바이러스에 자연적으로 감염된 개체 (왼쪽) 또는 약독 화 생 유행성 이하선염 바이러스로 예방 접종 된 개체 (오른쪽)의 유행성 이하선염 바이러스 항원. 각 원은 생물학적 복제를 나타냅니다. 대표적인 LC-MS 실행 (기술 복제의 예는 그림 S1C에 제공됨). 통계 분석은 쌍으로 수행되었습니다 t (A), (B) 및 (C)에 대한 테스트와 사후 Bonferroni 수정이 포함 된 혼합 모델 양방향 ANOVA t 테스트 그룹 간의 Fc 푸코 실화 비교는 (D) 및 (E)에 대해 수행되었습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. * P P

일부 개인이 다른 사람보다 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 생성하는 내재적 능력이 더 큰지 여부를 테스트하기 위해 IgG1-Fc 푸코 실화 수준을 동일한 개인 내의 두 가지 다른 항원과 비교했습니다. 항 -HPA-1a 및 항 -CMV (그림 S3A) 나 항 -HIV 및 항 -CMV 항체 (그림 S3B) 모두에서 동일한 개체 내에서 두 개의 서로 다른 항원 사이의 어 푸코 실화 수준을 비교할 때 상관 관계가 관찰되지 않았습니다. . 따라서 afucosylation의 수준은 유전학과 같은 일반적인 숙주 요인에 의해 미리 결정되지 않고 특정 트리거가 모호한 상태로 다소 확률 적이거나 다중 요인입니다.

Afucosylated IgG 생성 약독 화 된 외피 바이러스 백신

강력한 어 푸코 실화 IgG가 형성되는 면역 학적 맥락을 추가로 조사하기 위해, 우리는 서로 다른 맥락에서 동일한 바이러스 항원에 대한 면역 반응을 비교했습니다. 먼저, HBV에 자연적으로 감염되었거나 재조합 HBsAg 단백질로 백신을 접종 한 인간의 B 형 간염 표면 항원 (HBsAg) 특이 항체 당화를 비교했습니다 (그림 2D). 총 IgG1-Fc 푸코 실화 수준은 두 그룹에서 유사했지만, 항 -HBsAg IgG1-Fc 푸코 실화는 자연 감염 그룹의 총 IgG 또는 항원 특이 적 IgG-Fc 푸코 실화와 비교할 때 HBsAg 단백질로 백신을 접종 한 개인에서 상승했습니다. (그림 2D). 따라서 자연 감염을 치료 한 개체의 HBsAg 특이 적 항체는 단백질 서브 유닛 백신 접종을받은 개체에 비해 낮은 Fc 푸코 실화를 나타냅니다. 이는 어 푸코 실화 된 IgG 반응에 항원 자극에 대한 특정 상황이 필요함을 강력하게 시사합니다.

그런 다음 자연 감염 또는 백신 접종 후 형성된 볼거리 및 홍역 바이러스에 대한 항 바이러스 IgG 반응을 비교했습니다. 약독 화 된 살아있는 바이러스. HBV 단백질 서브 유닛 백신과는 달리, 약독 화 생백신은 모두 자연 감염 대응 물과 비교하여 유사한 항원 특이 적 Fc 푸코 실화를 나타 냈습니다 (그림 2E 및 그림 S4). 홍역에서는 어 푸코 실화 된 IgG를 생성하는 경향이 약한 반면 볼거리 반응은 두 가지 예방 접종 경로에 의해 분명한 어 푸코 실화 징후를 보였습니다 (그림 2E 및 그림 S4 및 S5).

Afucosylated IgG는 중증 COVID-19 환자에서 발견됩니다

그런 다음 이러한 유형의 반응이 COVID-19 환자에게도 영향을 미치는지 테스트했습니다. COVID-19의 증상은 무증상 또는 경미한자가 제한 감염에서 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)으로 이어지는 심각한기도 염증에 이르기까지 매우 다양하며, 종종 치명적인 결과를 가져옵니다 ( 20 , 21 ). 두 극단적 인 궤적 모두 유사한 초기 반응을 따릅니다. 환자는 약 1 주일 정도의 비교적 경미한 증상이 나타난 다음 두 번째 물결이 발생하여 질병이 해결되거나 생명을 위협하는 표현형이 심각하게 악화됩니다 ( 20 , 21 ). 두 반응 유형의시기와 차등 임상 결과는 질병과 싸우기 위해 면역 체계가 취하는 다른 경로를 제안했습니다. 지금까지이 두 가지 가상의 면역 학적 경로를 구별 할 수있는 명확한 증거가 나오지 않았습니다. 우리의 가설과 다른 외피 바이러스에 대해 관찰 된 반응에 따라, 세포 표면과 바이러스 외피에서 발현되는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 (S)에 대한 항 S IgG 반응은 낮은 수준의 코어로 강하게 치우쳐졌습니다. 푸코 실화. 대조적으로 세포 표면이나 바이러스 외피에서 발현되지 않는 뉴 클레오 캡시드 단백질 (N)에 대한 반응은 높은 수준의 푸코 실화를 특징으로합니다 (그림 3A). IgG 반응은 SARS-CoV-2에 대해 매우 특이적인 것으로 나타 났는데, 이는 발병 전 샘플에서 SARS-CoV-2 항원에 대한 반응성이 매우 약하거나 부재했기 때문에 더 보존 된 N 항원에 대해서도 마찬가지입니다 (그림 S6) ( 22 ). 중환자 실 (ICU)에 입원 한 최근 (5 일 미만) ARDS 환자의 항 S IgG1 반응은 무증상이거나 상대적으로 경미한 증상 (비 -ARDS)이있는 환자로 구성된 회복기 혈장 기증자보다 푸코 실화가 훨씬 적었습니다. 그림 3A).

무화과. 삼 S IgG1은 중환자 COVID-19 환자에서 현저하게 감소합니다.

() Fc 푸코 실화, () 갈 락토 실화, () 시알 화 및 () anti-S, anti-N 및 total IgG1 fr의 이분 정도 ARDS 환자 및 비 ARDS 기증자가 무증상으로 또는 초기 화면에서 가벼운 증상으로 감염을 치료합니다. (이자형) [(E) to (H)] anti-S 및 [(I) to (L)] [(E), (F), (I), and (J)] ARDS 환자 및 [(G), (H), (K), and (L)] 비 ARDS 사례에서 anti-N. (미디엄) anti-N과 anti-S IgG1의 상관 관계 -Fc 푸코 실화. () 유발 된 대 식세포에서 IL-6 방출의 대표적인 예 polyinosinic : polycytidylic acid [poly(I:C)]의 유무에 관계없이 글리코 엔지니어링 된 IgG 복합체로 자극을 통해 FcγR에 의해 생성됩니다. (영형) 혈장 IL-6 농도와 항 -S IgG1-Fc 푸코 실화. () 혈장 CRP 농도와 항- S IgG1-Fc 푸코 실화. 각 원은 생물학적 복제를 나타냅니다 : n =ARDS의 경우 20, n =비 ARDS의 경우 23 [(A) to (D)], n =17 및 =종 방향 ARDS 및 비 ARDS의 경우 각각 14 [(E) to (L)]. LC-MS 데이터에 대한 기술적 복제의 예가 그림에 나와 있습니다. S1C. [(F), (H), (J), and (L)] IgG 데이터는 두 가지 기술 실험에서 표준 풀에 대해 보정 된 대표적인 ELISA 값입니다. (M), n 에서 사용되는 모든 사용 가능한 페어링 데이터 =40. (N) 대 식세포에 의한 IL-6 생산은 각 점 ( n =3) 기술 뒤로 젖히다. 여섯 가지 생물학적 복제물이 모두 그림에 나와 있습니다. S13. CRP 및 IL-6 번호는 사용 가능한 모든 쌍 데이터 [(O) n=82 and (P) n=53]를 사용하여 Meso Scale Discovery의 임상 매개 변수 및 IL-6 데이터에서 얻었습니다. 통계 분석은 사후 Bonferroni 보정 t 그룹 간의 글리코 실화 형질 및 사이토 카인 분비를 비교하기위한 테스트. Spearman의 상관 관계는 (O) 및 (P)에서 수행되었습니다. anti-S 및 anti-N에 대한 Fc 푸코 실화 수준 간의 상관 관계를 테스트하기 위해 Pearson의 상관 관계를 수행했습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. * P P P

“data-hide-link-title=”0 “data-icon-position=” “href=”https://science.sciencemag.org/content/sci/371/6532/eabc8378/F4. large.jpg? width=800 & height=600 & carousel=1 “rel=”gallery-fragment-images-686031066 “title=”중환자 COVID-19 환자에서 anti-S IgG1의 Fc 푸코 실화 수준이 크게 감소합니다. (A) Fc 푸코 실화, (B) 갈 락토 실화, (C) 시알 화, 및 (D) ARDS 환자 및 비 -ARDS 공여자로부터의 항 -S, 항 -N 및 총 IgG1의 이분 정도는 무증상 또는 경미한 증상으로 감염을 제거합니다. 초기 화면에서. (E to L) [(E), (F), (I), and (J)] ARDS 환자 및 [(G), (H), (K), and (L)]에서 [(E) to (H)] anti-S 및 [(I) to (L)] anti-N에 대한 종단 IgG1-Fc 푸코 실화 및 IgG 양 ) 비 ARDS 사례. (M) 항 -N 및 항 -S IgG1-Fc 푸코 실화 사이의 상관 관계. (N) 폴리 이노신산 : 폴리 시티 딜산 [poly(I:C)]이 있거나없는 글리코 조작 된 IgG 복합체로 자극을 통해 FcγR에 의해 촉발 된 대 식세포로부터 IL-6 방출의 대표적인 예. (O) 혈장 IL-6 농도와 항 -S IgG1-Fc 푸코 실화 정도 사이의 상관 관계. (P) 혈장 CRP 농도와 항 -S IgG1-Fc 푸코 실화 정도 사이의 상관 관계. 각 원은 생물학적 복제를 나타냅니다. ARDS의 경우 n=20, 비 ARDS의 경우 n=23 [(A) to (D)], 세로 ARDS 및 비 -ARDS의 경우 n=각각 14 [(E) to (L)]. LC-MS 데이터에 대한 기술적 복제의 예가 그림에 나와 있습니다. S1C. [(F), (H), (J), and (L)] IgG 데이터는 두 가지 기술 실험에서 표준 풀에 대해 보정 된 대표적인 ELISA 값입니다. (M)에 사용 된 모든 사용 가능한 쌍 데이터에 대해 n=40입니다. (N) 대 식세포에 의한 IL-6 생산은 ELISA로 측정되었으며 각 점 (n =3) 기술 복제를 나타냅니다. 여섯 가지 생물학적 복제물이 모두 그림에 나와 있습니다. S13. CRP 및 IL-6 번호는 사용 가능한 모든 쌍 데이터 [(O) n=82 and (P) n=53]를 사용하여 Meso Scale Discovery의 임상 매개 변수 및 IL-6 데이터에서 얻었습니다. 통계 분석은 그룹 간의 글리코 실화 형질 및 사이토 카인 분비를 비교하기 위해 사후 테스트의 Bonferroni 보정을 사용하는 혼합 모델 양방향 ANOVA로 수행되었습니다. Spearman의 상관 관계는 (O) 및 (P)에서 수행되었습니다. anti-S 및 anti-N에 대한 Fc 푸코 실화 수준 간의 상관 관계를 테스트하기 위해 Pearson의 상관 관계를 수행했습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. P

무화과. 삼 항 S IgG1 수치는 중환자 COVID-19 환자에서 현저하게 감소합니다.

() Fc 푸코 실화, () 갈 락토 실화, () 시알 화 및 () anti-S, anti-N 및 total의 이분 정도 ARDS 환자 및 비 ARDS 공여자의 IgG1은 감염을 무증상으로 또는 초기 화면에서 경미한 증상으로 제거합니다. (이자형) [(E) to (H)] anti-S 및 [(I) to (L)] [(E), (F), (I), and (J)] ARDS 환자 및 [(G), (H), (K), and (L)] 비 ARDS 사례에서 anti-N. (미디엄) anti-N과 anti-S IgG1의 상관 관계 -Fc 푸코 실화. () 유발 된 대 식세포에서 IL-6 방출의 대표적인 예 polyinosinic : polycytidylic acid [poly(I:C)]의 유무에 관계없이 글리코 엔지니어링 된 IgG 복합체로 자극을 통해 FcγR에 의해 생성됩니다. (영형) 혈장 IL-6 농도와 항 -S IgG1-Fc 푸코 실화. () 혈장 CRP 농도와 항- S IgG1-Fc 푸코 실화. 각 원은 생물학적 복제를 나타냅니다 : n =ARDS의 경우 20, n =비 ARDS의 경우 23 [(A) to (D)], n =17 및 =종 방향 ARDS 및 비 ARDS의 경우 각각 14 [(E) to (L)]. LC-MS 데이터에 대한 기술적 복제의 예가 그림에 나와 있습니다. S1C. [(F), (H), (J), and (L)] IgG 데이터는 두 가지 기술 실험에서 표준 풀에 대해 보정 된 대표적인 ELISA 값입니다. (M), n 에서 사용되는 모든 사용 가능한 페어링 데이터 =40. (N) 대 식세포에 의한 IL-6 생산은 각 점 ( n =3) 기술 뒤로 젖히다. 여섯 가지 생물학적 복제물이 모두 그림에 나와 있습니다. S13. CRP 및 IL-6 번호는 사용 가능한 모든 쌍 데이터 [(O) n=82 and (P) n=53]를 사용하여 Meso Scale Discovery의 임상 매개 변수 및 IL-6 데이터에서 얻었습니다. 통계 분석은 사후 Bonferroni 보정 t 그룹 간의 글리코 실화 형질 및 사이토 카인 분비를 비교하기위한 테스트. Spearman의 상관 관계는 (O) 및 (P)에서 수행되었습니다. anti-S 및 anti-N에 대한 Fc 푸코 실화 수준 간의 상관 관계를 테스트하기 위해 Pearson의 상관 관계를 수행했습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. * P P P

이러한 감소 된 항 -S IgG의 Fc 푸코 실화 수준은 전체 IgG-Fc 때문에 염증의 결과가 아닙니다. 푸코 실화 수준은 두 그룹간에 유사했으며 일반 인구 (~ 94 %)에서보고 된 것과 유사했습니다 ( 12 , 18 ). 또한, IgG1-Fc 갈 락토 실화 및 항 -S 및 항 -N 반응의 시알 화 (그림 3, B 및 C)는 총 IgG에 비해 현저하게 증가했으며, 이는 활성 또는 활성 상태에서 증가 된 Fc 갈 락토 실화 및 시알 화를 설명하는 보고서와 일치합니다. 최근 예방 접종 ( 18 , 23 ). 총 IgG1-Fc 갈 락토 실화 및 시알 화 수준은 ARDS 환자에서 현저하게 낮아 졌는데, 이는 아마도 두 그룹 간의 약간의 연령 차이를 반영한 ​​것일 수 있습니다 [non-ARDS donors median age (IQR) 49 (40 to 55) years versus ARDS patients 60 (55–63) years (tables S1 and S2)]. Fc 갈 락토 실화와 시알 화 모두 나이가 들면서 감소합니다 ( 9 , 19 ). 항원 특이 적 IgG1-Fc의 갈 락토 실화 및 시알 화 증가는 보체 활성을 약 3 ~ 4 배 증가시킵니다. Fc 갈 락토 실화는 FcγRIII에 대한 어 푸코 실화 된 IgG의 친 화성을 약 2 배 더 향상시킵니다 ( 24 ). 마지막으로, Fc 이분법은 항 -N 및 항 -S 반응 모두에서 현저하게 낮아졌지만 (그림 3D), IgG-Fc 이분법은 Fc 수용체 나 보체 활성에 영향을 미치지 않기 때문에 이것의 생물학적 및 임상 적 관련성은 제한적입니다 ( 24 ). 또한 축적 된 증거는 IgG-Fc 글리코 실화의 일차적이고 주요한 생물학적 관련 변화가 코어 푸 코스의 부족이라는 것을 강력하게 시사합니다. 어 푸코 실화 된 IgG는 FcγRIIIa에 대한 친 화성이 20 ~ 40 배 증가하며, 이는 종종 세포 반응이없는 것에서 어 푸코 실화시 강력한 식세포 및 ADCC 반응으로의 절대적인 변화를 동반합니다 ( 5 , 15 ,

24 , 25 ). ARDS 환자의 anti-S 반응에서 낮은 Fc 푸코 실화는 이전에 뎅기열에 대해 제안 된 것과 유사한 FcγRIIIa를 통한 병리학 적 역할을 시사합니다 ( 15 ). 뎅기열에서, 다른 뎅기 혈청 형의 이전 감염에 대해 형성된 비중 화 항체는 또한 적은 양의 코어 푸코 실화 IgG를 갖는 경향이 있습니다. 감염을 예방할 수 없기 때문에 FcγRIIIa가 매개하는 면역 세포의 과잉 반응 ( 15 ).

anti-S의 푸코 실화 수준은 혈청 전환에서 가장 낮습니다

ICU 입원 후 1 주일 이내에 ARDS 환자를 샘플링했습니다. 비 ARDS 환자는 회복기 비 입원 환자였다. 시간 경과에 따라 관찰 된 IgG-Fc 글리코 실화 패턴에서 가능한 샘플링 편향을 제거하기 위해 두 그룹의 종단 샘플도 분석했습니다 ( 26 ). 혈소판 및 적혈구 항원에 대한 동종 항체 Fc 푸코 실화는 임신을 통한 자연 부스터 유무에 관계없이 최소 10 년 동안 안정적입니다 ( 12 , 14 ) 또는 수혈 ( 27 ). 이는 항 CMV 및 항 HIV 반응에도 적용됩니다 (그림 S7). 대조적으로, 모든 글리코 실화 형질의 변화는 ICU 입원 후 첫 주 동안 SARS-CoV-2에 대해 이미 관찰되었습니다 (그림 3, E에서 L, 그림 S8 및 S9). Fc 갈 락토 실화의 이러한 관찰 된 변화 (그림 S8)는 최근 면역화가 항원 특이 적 IgG-Fc 갈 락토 실화 및 시알 화 ([(O) n=82 and (P) n=53]의 일시적인 증가를 동반한다는 이전 보고서와 일치합니다. 18 , 23 ). 혈청 전환 후 모든 ARDS 환자는 처음에 비 ARDS 환자에 비해 낮은 수준의 항 -S IgG 푸코 실화를 나타 냈습니다. 푸코 실화 수준은 ARDS 환자에서 시간이 지남에 따라 증가하여 비 ARDS 코호트와 비슷한 수준에 도달했습니다 (그림 3, E 및 G). 푸 코스 수준의 증가는 IgG 수준의 동시 상승과 관련이 있었으며 (그림 3, E에서 H로, 그림 S10, A 및 B) 비 ARDS 코호트에서는 훨씬 덜 두드러졌습니다. 항 -N IgG 수에 대해서도 유사한 동역학이 관찰되었습니다 (그림 3, J 및 L). 감소 된 수준의 항 -N Fc 푸코 실화가 또한 ARDS 그룹에 존재했지만, 항 -S보다 낮은 정도였다 (그림 3, I 및 K, 그림 S11). ARDS 코호트에서 볼 수있는 항 -N IgG의 푸코 실화의 이러한 예상치 못한 감소는 고전적인 방관자 효과의 결과 일 수 있습니다 ( 28 ). 즉, 동일한 림프 기관에서 증식하는 B 세포는 항원 제시 세포 및 T 세포로부터 유사한 환경 신호를받습니다. anti-S 및 anti-N의 IgG1-Fc 푸코 실화는 anti-S에 대한 높은 수준의 어 푸코 실화와 유의하게 상관 관계가 있습니다 (그림 3M) ( P 18 , 23 ). 전체 IgG1-Fc 푸코 실화는 관찰 기간 동안 안정적으로 유지되었습니다 (그림 S8J 및 S9J).

Afucosylated IgG COVID-19의 염증에 기여

그런 다음 이러한 어 푸코 실화 된 항 -SARS-CoV-2 항체가 관찰 된 강력한 염증 반응에 어떻게 기여할 수 있는지 물었습니다. ARDS 환자에서. 폐포 대 식세포는 폐의 최전선 청소 제이며, 어 푸코 실화 된 IgG의 주요 골수성 감각 수용체 인 FcγRIIIa를 발현합니다. 따라서 우리는 인간의 급성기 반응에 가장 중요한 사이토 카인 인 전 염증성 사이토 카인 인터루킨 -6 (IL-6)의 생성을 자극 할 수있는 잠재력을 조사했습니다 ( 29 ) . Afucosylated IgG는 Toll-like receptor 3 (TLR3) 리간드와 함께 시험관 내 대 식세포로부터 IL-6 생산을 향상 시켰으며, 특히 ARDS 환자에서 두드러지게 발견되는 것처럼, 특히 afucosylated 및 고도의 galactosylated IgG를 사용할 때 더욱 그렇습니다 (그림 3N 및 그림 S8). 및 S13). 항 S IgG1-Fc 푸코 실화와 혈장 IL-6 및 C- 반응성 단백질 (CRP) 농도 사이에는 유의 한 상관 관계가있었습니다 (그림 3, O 및 P). 이것은 어 푸코 실화 된 항 -SARS-CoV-2 IgG가 COVID-19 발병에서 상당한 역할을한다는 우리의 가설과 일치합니다. 혈장 IL-6과 CRP의 농도는 afucosylated anti-S IgG가 나타날 즈음에 증가하여 직접적인 인과 관계를 시사했습니다 (그림 4, A 및 B). 혈장 D-dimer 수준도이 시간적 패턴을 공유했습니다 (그림 S14). 따라서 일부 환자의 어 푸코 실화 및 고갈 락토 실화 항 -S 및 항 -N IgG는 FcγRIIIa에 대한 결합 능력이 향상되어 전 염증성 사이토 카인의 과장 방출 및 후속 전신 염증을 유발할 수 있습니다 ( 폐포 대 식세포에서 24 ). 비 ARDS 사례에서는 IL-6 또는 CRP의 증가가 관찰되지 않았습니다 (그림 4, C 및 D, 그림 S15).

무화과. 4 anti–SARS의 종 방향 변화 -CoV-2 IgG1 Fc 푸코 실화, CRP 및 IL-6.

() Anti-S IgG 푸코 실화 및 anti-N IgG 푸코 실화 및 () IL-6 및 CRP 금액 [(A) and (B)] ARDS 코호트 및 [(C) and (D)] 비 ARDS 집단. (A) ~ (D)는 LC-MS 실행 [(A) and (C)]의 종단 생물학적 복제를 나타냅니다 (기술 복제의 예는 그림 S1C에서 사용 가능), CRP 획득 검증 된 Meso Scale Discovery 분석 ( n =ARDS의 경우 12 및 =비 ARDS의 경우 14, 표시된대로 환자 당 2 ~ 16 개의 세로 복제). 추가 비 ARDS 샘플은 그림에 제공됩니다. S15. 해시 기호 (#)는 이러한 지점이 IgG1- 글리코 실화 분석에 대한 검출 한계 미만이되기 전의 샘플을 나타냅니다. (A) 및 (B)의 수직 점선은 ICU 입원 및 ICU 퇴원 (검은 색) 또는 사망 (빨간색) 시간을 나타내는 반면, (B) 및 (D)의 점선 수평선은 IL-6 및 CRP 검출 한계를 나타냅니다.

“data-hide-link-title=”0 “data-icon-position=” “href=”https://science.sciencemag.org/content/sci/371/6532/ eabc8378 / F5.large.jpg? width=800 & height=600 & carousel=1 “rel=”gallery-fragment-images-686031066 “title=”항 -SARS-CoV-2 IgG1 Fc 푸코 실화, CRP 및 IL-6의 종 방향 변화 . (A 및 C) ARDS 코호트 및 [(A) and (B)]에서 항 -S IgG 푸코 실화 및 항 -N IgG 푸코 실화 및 (B 및 D) IL-6 및 CRP 양 비 ARDS 집단. (A) ~ (D)는 LC-MS 실행 [(A) and (C)]의 종단 생물학적 복제를 나타냅니다 (기술 복제의 예는 그림 S1C에서 사용 가능), CRP 획득 검증 된 Meso Scale Discovery 분석 (ARDS의 경우 n=12, 비 ARDS의 경우 n=14)을 사용하여 임상 매개 변수 및 [(B) and (D)] IL-6 데이터 , 표시된대로 환자 당 2 ~ 16 개의 세로 복제). 추가 비 ARDS 샘플은 그림에 제공됩니다. S15. 해시 기호 (#)는 이러한 지점이 IgG1- 글리코 실화 분석에 대한 검출 한계 미만이되기 전의 샘플을 나타냅니다. (A) 및 (B)의 수직 점선은 ICU 입원 및 ICU 퇴원 (검은 색) 또는 사망 (빨간색) 시간을 나타내는 반면, (B) 및 (D)의 점선 수평선은 IL-6 및 CRP 검출 한계를 나타냅니다. “>

그림 4 항 -SARS-CoV-2 IgG1 Fc 푸코 실화, CRP 및 IL-6의 종 방향 변화.

() Anti-S IgG 푸코 실화 및 anti-N IgG 푸코 실화 및 () ARDS 코호트 및 [(O) n=82 and (P) n=53]의 IL-6 및 CRP 금액 [(A) and (B)] 비 ARDS 코호트. (A) ~ (D)는 LC-MS 실행 [(A) and (C)]의 종단 생물학적 복제를 나타냅니다 (기술 복제의 예는 그림 S1C에서 사용 가능), CRP 획득 검증 된 Meso Scale Discovery 분석 ( n =ARDS의 경우 12 및 =비 ARDS의 경우 14, 표시된대로 환자 당 2 ~ 16 개의 세로 복제). 추가 비 ARDS 샘플은 그림에 제공됩니다. S15. 해시 기호 (#)는 이러한 지점이 IgG1- 글리코 실화 분석에 대한 검출 한계 미만이되기 전의 샘플을 나타냅니다. (A) 및 (B)의 수직 점선은 ICU 입원 및 ICU 퇴원 (검은 색) 또는 사망 (빨간색) 시간을 나타내는 반면, (B) 및 (D)의 점선 수평선은 IL-6 및 CRP 검출 한계를 나타냅니다.

토론

우리의 결과는 혈액에있는 동종 항원의 표면 막 단백질과 같은 막 내장 항원에 대한 afucosylated IgG1 면역 반응의 패턴을 보여줍니다 세포 또는 외피 바이러스 (1 차 감염을 종종 완료하는 약독 화 외피 바이러스 백신 포함). 이는 높은 수준의 IgG1-Fc 푸코 실화를 갖는 면역 반응이 일관되게 관찰 된 가용성 단백질 항원 및 비 외피 바이러스와 대조됩니다. COVID-19 환자에서 어 푸코 실화 된 항 -N IgG가 있었지만, 혈청 전환 후 1-2 주가 더 이상 그렇지 않았습니다.

우리는 B 세포 수용체와 설명되지 않은 숙주 수용체-리간드 쌍 (들)이 제공하는 적어도 두 개의 신호를 결합하여 항원 제시 막이 B 세포에 의해 직접 감지된다고 가정합니다. 이 2 단계 메커니즘은 오래 지속되는 afucosylated IgG 반응의 생성에 필수적이며 가용성 단백질, 외피 바이러스의 내부 단백질 또는 비 외피 바이러스에 의해 유발되지 않습니다 (그림 5). 대안 적으로, 차등 항원 인식은 더 복잡 할 수 있으며 항원 제시 세포, T 세포 및 / 또는 사이토 카인으로부터의 추가 상호 작용이 필요할 수 있습니다. 이 개념은 anti-S 반응과 함께 발생하는 anti-N SARS-CoV-2 반응에 의해 뒷받침되며, 이는 림프계 미세 환경의 근위 요인이 반응에 영향을 미칠 수 있음을 시사합니다.

무화과. 5 항원의 차이를 설명하는 가상 모델 컨텍스트는 변경된 IgG 글리코 실화를 유발하는 변경된 면역 신호를 생성 할 수 있습니다.

() 가용성 단백질 항원에 대한 면역 반응 : B 세포 수용체 (BCR; 막 Ig)가 활성화되어 정상적인 푸코 실화 항체가 생성됩니다. () 동종 항원에 대한 면역 반응의 경우 적혈구 (RBC)는 BCR 및 아마도 자기 인식 신호를 제공하는 다른 설명되지 않은 면역 조절 수용체-리간드 쌍 (들)에 의해 인식됩니다. () 외피 바이러스 감염 및 약독 화 바이러스에 대한 면역 반응 , B 세포에 의한 외피 바이러스에 감염된 세포의 인식은 세포 동종 항원 (B)의 인식과 유사합니다. 초기 인식은 잠재적으로 외피 바이러스에 감염된 세포 및 / 또는 바이러스 조립 후 (맨 오른쪽)에 발생할 수 있습니다. (B) 및 (C)에서 제안 된 신호는 B 세포의 변경된 글리코 프로그래밍을 유발하여 낮은 Fc 푸코 실화 (빨간색 삼각형, 푸 코스) 및 향상된 ADCC를 특징으로하는 뚜렷한 IgG 반응으로 절정에 이릅니다. 이 모델은 가용성 단백질, 비 외피 바이러스 및 박테리아와 같은 세포 병원체에 대한 면역 반응이 외피 바이러스 (및 약독 화 바이러스)에 대한 반응과 다른 이유를 잠재적으로 설명합니다. 또한 동종 항원에 대한 면역 반응이 외피 바이러스 감염과 면역 학적으로 유사한 이유를 설명 할 수 있습니다.

“data-hide-link-title=”0 “data-icon-position=” “href=” https://science.sciencemag.org/content/sci/371/6532/eabc8378/F6.large.jpg?width=800&height=600&carousel=1 “rel=”gallery-fragment-images-686031066 “title=”가상 모델 다른 항원 컨텍스트가 변경된 IgG 글리코 실화를 유발하는 변경된 면역 신호를 생성 할 수있는 방법을 설명합니다. (A) 가용성 단백질 항원에 대한 면역 반응 : B 세포 수용체 (BCR; 막 Ig)가 활성화되어 정상적인 푸코 실화 항체가 생성됩니다. (B) 동종 항원에 대한 면역 반응의 경우, 적혈구 (RBC)의 부계 동종 항원은 BCR 및 아마도 자기 인식을위한 신호를 제공하는 다른 설명되지 않은 면역 조절 수용체-리간드 쌍 (들)에 의해 인식됩니다. (C) 외피 바이러스 감염 및 약독 화 바이러스에 대한 면역 반응의 경우, B 세포에 의한 외피 바이러스 감염 세포 인식은 세포 동종 항원 인식과 유사합니다 (B). 초기 인식은 잠재적으로 외피 바이러스에 감염된 세포 및 / 또는 바이러스 조립 후 (맨 오른쪽)에 발생할 수 있습니다. (B) 및 (C)에서 제안 된 신호 전달은 B 세포의 변경된 글리코 프로그래밍을 유발하여 낮은 Fc 푸코 실화 (빨간색 삼각형, 푸 코스) 및 향상된 ADCC를 특징으로하는 뚜렷한 IgG 반응으로 절정에 이릅니다. 이 모델은 가용성 단백질, 비 외피 바이러스 및 박테리아와 같은 세포 병원체에 대한 면역 반응이 다른 이유를 잠재적으로 설명합니다. 엔벨로프 바이러스 (및 약독 화 된 바이러스)에 대한 om 반응. 또한 동종 항원에 대한 면역 반응이 외피 바이러스 감염과 면역 학적으로 유사한 이유를 설명 할 수 있습니다. “>

그림 5 항원의 차이를 설명하는 가상 모델 컨텍스트는 변경된 IgG 글리코 실화를 유발하는 변경된 면역 신호를 생성 할 수 있습니다.

() 면역 가용성 단백질 항원에 대한 반응 : B 세포 수용체 (BCR; 막 Ig)가 활성화되어 정상적인 푸코 실화 항체가 생성됩니다. () 동종 항원에 대한 면역 반응의 경우 적혈구 (RBC)는 BCR 및 아마도 자기 인식 신호를 제공하는 다른 설명되지 않은 면역 조절 수용체-리간드 쌍 (들)에 의해 인식됩니다. () 외피 바이러스 감염 및 약독 화 바이러스에 대한 면역 반응 , B 세포에 의한 외피 바이러스에 감염된 세포의 인식은 세포 동종 항원 (B)의 인식과 유사합니다. 초기 인식은 잠재적으로 외피 바이러스에 감염된 세포 및 / 또는 바이러스 조립 후 (맨 오른쪽)에 발생할 수 있습니다. (B) 및 (C)에서 제안 된 신호 전달은 B 세포의 변경된 글리코 프로그래밍을 유발하여 낮은 Fc 푸코 실화 (빨간색 삼각형, 푸 코스) 및 향상된 ADCC를 특징으로하는 뚜렷한 IgG 반응으로 절정에 이릅니다. 이 모델은 가용성 단백질, 비 외피 바이러스 및 박테리아와 같은 세포 병원체에 대한 면역 반응이 외피 바이러스 (및 약독 화 바이러스)에 대한 반응과 다른 이유를 잠재적으로 설명합니다. 또한 동종 항원에 대한 면역 반응이 외피 바이러스 감염과 면역 학적으로 유사한 이유를 설명 할 수 있습니다.

이 연구는 숙주 세포막의 맥락에서 외부 B 세포 항원을 제공하는 것이 필요할 수 있지만 다량의 면역 반응을 유발하기에 충분하지 않을 수 있음을 시사합니다. 오래 지속되는 afucosylated IgG ( 17 ). 이것은 다른 항원에 대한 동일한 개인의 뚜렷한 반응뿐만 아니라 개인 간의 다양한 Fc 푸코 실화 수준으로 해석됩니다. 신생아 동종 면역 세포 감소증 ([(B) and (D)]에서 나타난 바와 같이 환자간에 관찰 된 항원 특이 적 어 푸코 실화 반응 수의 큰 차이는 질병 중증도의 가변성에 기여합니다 ( 12 , 13 , 17 ) 및 뎅기열 ( 15 ). 여기에서 우리는 또한 COVID-19의 발병에 대한 중요성을 보여줍니다. 따라서, 어 푸코 실화는 잠재적으로 질병 궤적을 예측하고이 FcγRIIIa 자극을 최소화하기위한 향후 치료법을 안내하는 데 도움이 될 수 있습니다.

IgG-Fc 어 푸코 실화는 강력한 면역 반응을 일으 킵니다. 즉, FcγRIIIa 발현 자연 살해 (NK) 세포, 단핵구 및 대 식세포뿐만 아니라 FcγRIIIb 발현 과립구가 촉발되어 표적 세포를 파괴한다. 이 반응은 HIV ( 16 ), 사용 가능한 약독 화 된 외피 바이러스 백신 셔틀 ( 백신 기반 접근법이있는 표적에 대해 30 ) 실패한. 그러나이 현상은 두 뎅기 바이러스 ( 15 ) 및 SARS-CoV-2. SARS-CoV의 스파이크 단백질을 운반하는 약독 화 바이러스 백신은 강력한 항체 의존성 강화 반응을 생성하는 것으로 알려져 있습니다 ( 31 ) 중환자 SARS-CoV-2 환자의 병리 모방 ( 21 ). 이것은 SARS-CoV-2 (에 대한 쥐 모델에서 볼 수 있듯이 서브 유닛 단백질 백신이 더 안전한 옵션 일 수 있음을 시사합니다. ) 32 ), 백신이 보호 강화에 기여할 수있는 강력한 중화 효과를 유도하지 않는 한.

항 -S IgG의 어 푸코 실화는 일부 환자에서 COVID-19의 악화로 인해 ARDS가 발생합니다. 따라서 항체는 보호 할 수 있지만 잠재적으로 양날의 칼처럼 행동하고 관찰 된 사이토 카인 폭풍에 기여할 수 있습니다 ( 33 ). 따라서 이것은 개선 된 정맥 내 Ig (IVIg), 회복기 혈장 및 백신 요법의 개발에 직접적인 결과를 가져옵니다. 또한, SARS-CoV-2의 발병 기전에서 어 푸코 실화 된 항체의 제안 된 역할은 COVID-19의 치료를위한 추가적인 기회를 열 수 있습니다. 따라서 고역가 Ig 치료법을 생성하려는 시도는 푸코 실화 된 항 -SARS-CoV-2 항체가 풍부한 혈장을 사용하는 것이 바람직합니다. 이는 증상의 상승을 피하고 환자의 바이러스 중화를 촉진 할 수 있으며, 우선적으로 어 푸코 실화 된 IgG 반응을 개발하기 전에 가능합니다.

재료 및 방법

환자 샘플

건강한 혈액 네덜란드 암스테르담 Sanquin의 기증자 샘플을 사용하여 파보 바이러스 B19 ( n =22), 홍역 바이러스 ( n =24 개의 자연 감염, n =21 개의 약독 화 생백신), 유행성 이하선염 바이러스 ( n =24 개의 자연 감염 ,

n =21 개의 약독 화 생백신) 및 HBV 항체 ( n =17 개의 자연 감염, n =17 HBsAg 예방 접종). Anti-HPA-1a 샘플은 다른 곳에서 설명되었습니다 ( 14 ). HIV 샘플 ( n =80) HIV 감염 및 AIDS (ACS)에 대한 암스테르담 코호트 연구에서 HIV 특이 적 항체 글리코 실화를 분석하는 데 사용되었습니다. CMV 특이 적 항체를 정제하는 데 사용되는 말초 혈액 샘플 ( n =102)는 핀란드 적십자 혈액 서비스, 혈소판 면역학 연구소, 핀란드 헬싱키 및 HIV 코호트에서 수집 한 HPA-1a에 사용 된 것과 동일한 코호트에서 나왔습니다. 전술 한 바와. Amsterdam UMC COVID 연구 그룹의 ICU 환자의 SARS-CoV-2 환자 샘플이 포함되었으며 Sanquin 혈액 기증자는 SARS-CoV-2에 대해 혈청 양성을 발견했으며 잠재적 인 노출 후 모니터링 한 병원 직원의 경도 세로 샘플 ( 26 ). 환자 인구 통계 요약은 표 S1에 나와 있으며 ARDS COVID-19 환자에 대한 자세한 환자 치료는 표 S2에 나와 있습니다 (모두 환기가 필요함). ACS는 헬싱키 선언에 명시된 윤리 원칙에 따라 수행되었으며 모든 참가자는 서면 동의를 제공했습니다. 이 연구는 암스테르담 대학의 Academic Medical Center 기관 의료 윤리위원회의 승인을 받았습니다.

혈청으로부터 CMV 특이 적 항체 정제

CMV- 특이 적 항체는 항원- 코팅 된 플레이트 (Serion ELISA classic, Cytomegalovirus IgG, Würzburg, Germany). 혈청 (20μl)을 키트의 표본 희석제 (80μl)에 희석 한 다음 플레이트에서 37 ° C에서 1 시간 동안 배양했습니다. 키트의 양성 및 음성 대조군과 CMV 음성 환자 샘플을 대조군으로 사용했습니다. 플레이트를 키트의 세척 완충액 (300μl)으로 3 회, 인산염 완충 식염수 (PBS) (300μl)로 2 회, 탈 이온수 (300μl)로 2 회 세척했습니다. 이어서 결합 된 항체를 100 μl의 100 mM 포름산으로 용리시켰다. 빈 웰 및 CMV 음성 환자 샘플의 용출액에서 IgG가 발견되지 않았습니다.

혈청에서 홍역 바이러스 및 유행성 이하선염 바이러스 특정 항체 정제

농업 별 항체는 항원 코팅 된 플레이트 (Serion ELISA classic, Measles IgG 및 Mumps IgG, Würzburg, Germany)를 사용하여 정제되었습니다. 혈청 (20μl)을 키트의 표본 희석제 (80μl)에 희석 한 다음 플레이트에서 37 ° C에서 1 시간 동안 배양했습니다. 키트의 양성 및 음성 대조군이 사용되었습니다. 플레이트를 키트의 세척 완충액 (300μl)으로 3 회, PBS (300μl)로 2 회, 50mM 중탄산 암모늄 (300μl)으로 2 회 세척했습니다. 이어서 결합 된 항체를 100 μl의 100 mM 포름산으로 용리시켰다. IgG는 양성 대조군의 용출액에서 발견되었으며 블랭크 웰 및 음성 대조군 샘플의 용출액에서는 IgG가 발견되지 않았습니다.

혈청에서 HBV 특이 적 항체 정제

감염 및 백신 접종 후 환자로부터 HBsAg 특이 적 항체를 분리하기 위해 HB 항원 코팅 플레이트 (ETI-AB-AUK-3, Diasorin, Schiphol-Rijk, 네덜란드)를 사용했습니다. 혈청 (20μl)을 키트의 표본 희석액 (80μl)에 희석 한 다음, 흔들면서 실온 (RT)에서 1 시간 동안 플레이트에서 배양했습니다. 네덜란드 암스테르담의 Sanquin에서 얻은 HBV 순진 및 HBV 분해 샘플을 대조군으로 사용했습니다. CMV 특이 적 항체에 대해 상기와 같이 특이 적 항체의 세척 및 용출을 수행 하였다.

혈청으로부터 HIV 특이 항체 정제

HIV 항원 코팅 플레이트 (Murex HIV1.2.0 kit 9E25- 01, Diasorin, Schiphol-Rijk, the Netherlands). 혈청을 희석 (50μl)하고 키트의 표본 희석제 (50μl)에 희석 한 다음 플레이트에서 1 시간 동안 실온 (RT)에서 흔들면서 배양했습니다. 양성 대조군으로 항 -HIV gp120 모노클로 날이 사용되었습니다 (IgG1 b12; PBS 중 1mg / ml의 정제 된 항체 100μg; NIH Aids Reagent Program, La Jolla, CA, USA). CMV 특이 적 항체에 대해 상기와 같이 특이 적 항체의 세척 및 용출을 수행 하였다.

혈청

파보 바이러스 B19 특이 적 항체는 파보 바이러스 B19 항원 코팅 플레이트 (Abcam1788650- Anti-Parvovirus B19 IgG ELISA, Cambridge, UK)를 사용하여 분리되었습니다. 혈청 (20μl)을 키트의 표본 희석액 (80μl)에 희석 한 다음, 흔들면서 실온 (RT)에서 1 시간 동안 플레이트에서 배양했습니다. 키트의 양성 및 음성 대조군을 대조군으로 사용했습니다. CMV 특이 적 항체에 대해 상술 한 바와 같이 특이 적 항체의 세척 및 용출을 수행 하였다.

혈장에서 항 -N 및 항 -S 특이 항체 정제

SARS-Cov-2 특이 항체는 항원 코팅 플레이트 (NUNC, Roskilde, Denmark)를 사용하여 정제되었습니다. 플레이트는 최근에 기술 된 바와 같이 생산 된 재조합 삼량 체화 스파이크 단백질로 4 ° C에서 밤새 코팅되었습니다 ( 34 ) 또는 PBS의 N 단백질 [GenBank: MN908947, produced in HEK cells with a HAVT20 leader peptide, 10x His tag, and a BirA tag (24)] (각각 5 μg / ml 및 1 μg / ml). 플레이트는 0.05 % TWEEN 20 (PBS-T)이 보충 된 PBS (250μl)로 3 회 세척되었습니다. 혈장 (20μl)을 PBS-T (180μl)에 희석 한 다음 흔들면서 실온 (RT)에서 1 시간 동안 배양했습니다. COVID-19 대유행 이전의 혈청이 음성 대조군으로 사용되었습니다. 플레이트를 PBS-T (250μl)로 3 회, PBS (250μl)로 2 회, 250μl 중탄산 암모늄 (50mM)으로 2 회 세척했다. 결합 된 항체는 100mM 포름산 (200μl)으로 용출되었습니다.

혈청으로부터 총 IgG 정제

96 웰 필터 플레이트 (Millipore Multiscreen, Amsterdam, the 네덜란드) ( 12 ) 또는 AssayMAP Bravo (Agilent Technologies, Santa Clara, USA)에서 Protein G 카트리지를 사용합니다. 간단히, PBS에 희석 된 1 μl의 혈청을 카트리지에 적용한 다음 PBS 및 LC-MS 순수로 세척했습니다. IgG 항체는 1 % 포름산으로 용출되었습니다.

질량 분석 IgG-Fc 당화 분석

항원 특이 적 항체 또는 총 IgG를 포함하는 용리액을 V- 바닥 플레이트에 수집하고 50 ° C에서 2.5 시간 동안 진공 원심 분리로 건조했습니다. HPA1a, CMV, HIV, Parvovirus B19, HBV 및 COVID-19 샘플은 이전에 설명한대로 트립신을 사용하여 단백질 분해 절단을 받았습니다 ( 12 ). 홍역 및 볼거리 코호트 샘플을 0.4 % 나트륨 데 옥시 콜레이트 (SDC), 10mM TCEP, 40mM 클로로 아세트 아미드 및 100mM TRIS pH 8.5를 함유하는 완충액에 용해시켰다. 95 ° C에서 10 분 동안 배양 한 후, 50mM 중탄산 암모늄에 250ng의 트립신을 첨가했습니다. 2 % 포름산으로 산성화하여 밤새 배양 한 후 소화를 중단시켰다. MS 주입 전, 20,000 g 에서 샘플을 원심 분리하여 SDC 침전물을 제거했습니다. 30 분 동안. IgG Fc- 글리코 실화 분석은 amaZon 속도 이온 트랩 MS (Bruker Daltonics)와 결합 된 Ultimate 3000 RSLCnano 시스템 (Dionex / Thermo Scientific, 네덜란드 브레다)에서 nanoLC 역상 (RP)-전자 분무 (ESI) -MS로 수행되었습니다. , Bremen, Germany) 앞에서 설명한대로 (12). 또는 홍역, 유행성 이하선염 및 COVID-19 코호트는 이전에 설명한대로 ImpactHD 4 중 극자 비행 시간 MS (Bruker Daltonics)에서 측정되었습니다 ( 35 ). 현재 연구에서는 글리코 펩티드 수준 (

에서 IgG2 및 IgG4와의 간섭 가능성으로 인해 IgG3을 분석하지 않고 IgG1에 집중했습니다. 36

). Skyline 소프트웨어 (버전 4.2.19107)로 분석 한 홍역, 볼거리 및 COVID-19 코호트를 제외한 모든 샘플에 대해 DataAnalysis 소프트웨어 (버전 5.0; Bruker Daltonics)를 사용하여 질량 분석 결과를 추출하고 평가했습니다. 모든 글리코 펩티드 종 (표 S3)의 신호 강도의 합이 음성 샘플에 표준 분할의 10 배를 더한 것보다 높을 때 데이터가 신뢰할 수있는 것으로 판단되었습니다. 그렇지 않으면 데이터가 제외되었습니다 ( 12 ). 글리 칸 형질의 총 수준은 표 S4에 설명 된대로 계산되었습니다.

사이토 카인 방출 분석

단핵구는 버피 코트에서 분리되었고 이전에 설명한대로 분화되었습니다 ( 37 ) M-CSF 및 IL-10을 사용합니다. 이로 인해 폐포 대 식세포와 유사한 단핵구 유래 대 식세포와 유사한 표현형이 생성됩니다 ( 37 , 38 ). 생성 된 IgG 면역 복합체를 위해, 당 조작 된 IgG1 2μg / ml ( 39 )를 96- 웰 고친 화성 플레이트 (Nunc; Roskilde; 덴마크)상의 PBS에서 밤새 코팅 하였다. 대 식세포 (50,000 / 웰)를 20μg / ml의 폴리 (I : C) (Sigma-Aldrich)와 조합하여 범례에 설명 된대로 사전 코팅 된 플레이트에서 자극했습니다. IL-6 생산을 측정하기 위해 24 시간 자극 후 상청액을 수확 하였다. IL-6은 제조업체의 지침 (U-CyTech Biosciences)에 따라 IL-6 효소 결합 면역 흡착 분석 (ELISA) 키트를 사용하여 검출되었습니다. 코팅 및 검출 항체 모두 1 : 200으로 희석되었습니다.

Meso Scale Discovery Multiplex assay

V-PLEX Custom Human Cytokine10-plex 키트는 MSD (Meso Scale Discovery)에서 구입했습니다. 동결 건조 된 칵테일 믹스 교정기는 제공된 분석 희석제에서 각각 재구성되었습니다. IL-6 측정을 위해 혈장 및 혈청 (10μl)을 40μl MSD 샘플 희석제에 희석했습니다. 4 ° C에서 희석 된 샘플 및 표준 물질을 밤새 배양하면서 제조업체의 지침에 따라 분석을 수행했습니다. 전기 화학 발광 신호 (ECL)는 MESO QuickPlex SQ 120 플레이트 리더 (MSD)로 감지되었으며 Discovery Workbench Software (v4.0, MSD)로 분석되었습니다.

항 –SARS-CoV2 항체 수준

항체 수준은 ELISA에 의해 정량화되었습니다. 간단히 말해서, 샘플은 S 또는 N- 단백질로 코팅 된 미세 역가 플레이트에서 0.1 % 폴리 소르 베이트 -20 및 0.3 % 젤라틴 (PTG)이 보충 된 PBS에서 100 배에서 1200 배 희석으로 테스트되고 RT에서 1 시간 동안 배양되었습니다. 두 단백질 모두 이전에 설명한대로 생성되었습니다 ( 26 ). 세척 후, 0.5μg / ml의 HRP- 접합 된 항-인간 IgG (MH16-1, Sanquin)를 PTG에 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 배양 하였다. TMB 기질의 효소 전환 후 450 nm 및 540 nm에서 흡광도를 측정했습니다. 100 AU / ml로 설정된 회복기 COVID-19 환자의 기준 혈장 풀과 비교하여 항체 결합을 평가했습니다.

통계 분석

Windows 용 GraphPad Prism (버전 8.0.2) ( GraphPad Software, La Jolla, CA; http://www.graphpad.com). 전체 및 항원 특이 적 IgG에 대한 Fc- 푸코 실화가 테스트 된 코호트간에 다른지 여부를 분석하기 위해 양방향 분산 분석 (ANOVA) 및 쌍 [(A) and (B)]을 사용하여 통계 분석을 수행했습니다. 개별 코호트에 대해 지정된 t 테스트. 자극 된 대 식세포로부터의 사이토 카인 방출을 비교하기 위해 동일한 테스트가 사용되었습니다. 동일한 개체에서 두 개의 특정 항체의 Fc- 푸코 실화 프로파일이 상관 관계가 있는지 조사하기 위해 Pearson 상관 관계를 사용하여 통계 분석을 수행했습니다. Pearson의 상관 관계는 또한 anti-S와 anti-N IgG의 Fc-fucosylation 간의 상관 관계를 테스트하는 데 사용되었습니다. 사이토 카인 방출과 IgG Fc- 푸코 실화 사이의 상관 관계뿐만 아니라 anti-S Fc 푸코 실화 정도와 CRP 수준 사이의 상관 관계를 테스트하기 위해 Spearman의 상관 관계를 수행했습니다. 통계적으로 유의 한 차이 만 표시됩니다. * P P P

  • 암스테르담 UMC COVID-19 바이오 뱅크 연구 그룹 공동 연구자 및 제휴는 보충 자료에 나열되어 있습니다.

참조 및 참고

  1. 비. Quinlan, H. Mou, L. Zhang, Y. Guo, W. He, A. Ojha, M. Parcells, G. Luo, W. Li, G. Zhong, H. Choe, M. Farzan, bioRxiv 036418 [Preprint]. 2020 년 4 월 12 일. . doi : 10.1101 / 2020.04.10.036418

감사의 말 : 도움을 주신 RJM ten Berge에게 감사드립니다. HIV 감염 및 AIDS에 대한 암스테르담 코호트 연구는 Amsterdam Health Service, 암스테르담 대학의 Academic Medical Center 및 Sanquin Blood Supply Foundation 간의 협력입니다. ACS는 네덜란드 HIV 모니터링 재단의 일부이며 네덜란드 공중 보건 및 환경 연구소의 재정적 지원을 받고 있습니다. 우리는 지속적인 참여에 대해 모든 코호트 참가자에게 큰 빚을지고 있습니다. 자금 : 이 작업은 LSBR 보조금 1229 및 1908 ( GV), 유럽 연합 (7 차 프레임 워크 프로그램 HighGlycan 프로젝트, 보조금 278535 및 H2020 프로젝트 GlySign, 보조금 722095), Marie Skłodowska-Curie 보조금 847551 (JdD에), 네덜란드 과학 연구기구 (NWO) Vici 보조금 ( RWS), ZonMW COVID-19는 Amsterdam Infection and Immunity Institute로부터 10430 01201 0008 (JdD에) 및 10430 01201 0021 (GV에), COVID-19는 24184 (JdD에) 및 24175 (MJvG에)를 부여합니다. 저자 기여 : 모든 샘플은 SS, ST, APJV에 의해 수집되었습니다. , AEHB, RV, MDL, MB, TS, SdB, FL, NAK, HLZ, GW 및 MES; MES, CAMK, HRP, JN, MDL 및 ELdG는 항체 정제, 질량 분석 분석 및 데이터 처리를 수행했습니다. FL, MB, TS 및 PJMB는 재조합 항원을 생성했습니다. NILD는 항 -COVID-19 ELISA를 수행했습니다. MES, EL.dG, MDL, SdB, APJV, GV 및 CEvdS는 임상 데이터를 분석하고 데이터 분석을 수행했습니다. WH 및 CEG는 대 식세포 자극 실험 및 사이토 카인 ELISA를 수행했습니다. H.-JC는 MSD 실험 및 분석을 수행했습니다. MDL, MES, ELdG, MW 및 GV는 그림과 표를 생성했습니다. MJvG, MdW, JdD, TR, RWS, CEvdS, MW 및 GV가 연구를 감독했습니다. 모든 저자는 데이터 분석 및 해석에 기여했습니다. MDL, MES, ELdG, CEvdS, MW 및 GV가 논문을 작성했으며 모든 저자가 비판적으로 수정하고 승인했습니다. 경쟁 관심: 저자는 경쟁 이익을 선언하지 않습니다. 데이터 및 자료 가용성 : 모든 데이터는 원고 또는 보충 자료. 이 저작물은 CC BY 4.0 (Creative Commons Attribution 4.0 International) 라이선스에 따라 라이선스가 부여되며 원본 저작물이 적절하게 인용 된 경우 모든 매체에서 제한없이 사용, 배포 및 복제 할 수 있습니다. 이 라이센스의 사본을 보려면 https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/을 방문하십시오. 이 라이선스는 제 3 자에게 제공된 기사에 포함 된 그림 / 사진 / 아트 워크 또는 기타 콘텐츠에는 적용되지 않습니다. 이러한 자료를 사용하기 전에 저작권 보유자로부터 승인을 받아야합니다.

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Author: Bentley ko

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